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    簡單介紹一下振動圓二色測試的注意事項

    點擊次數:82 發布時間:2020-05-18

      振動圓二色是應用較為廣泛的測定蛋白質二級結構的方法,是研究稀溶液中蛋白質構象的一種快速、簡單、較的方法。它可以在溶液狀態下測定,較接近其生理狀態。而且測定方法快速簡便,對構象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質二級結構的主要手段之一,并已廣泛應用于蛋白質的構象研究中。用于推斷非對稱分子的構型和構象的一種旋光光譜。光學活性物質對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(ε)是不相等的,εL≠εR,即具有圓二色性。如果以不同波長的平面偏振光的波長λ為橫坐標,以吸收系數之差Δε=εL-εR為縱坐標作圖,得到的圖譜即是圓二色光譜,簡稱CD。如果某手性化合物在紫外可見區域有吸收,就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR,透射光不再是平面偏振光,而是橢圓偏振光,摩爾橢圓度[θ]與Δε的關系為:[θ]=3300Δε。振動圓二色也可以摩爾橢圓度為縱坐標,以波長為橫坐標作圖。由于△ε有正值和負值之分,所以也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負性圓二色譜。在紫外可見光區域測定與旋光譜,其目的是推斷有機化合物的構型和構象。
     
      振動圓二色測試事項
     
      (1)在標準操作時,譜帶寬度選為1nm。對于高分辨率測量,要用較窄的狹縫寬度,此時光電倍增管的電壓較高,譜的信噪比差。雖然對于正常測量較佳譜帶寬度是1~2nm,但是在下列情況下要犧牲分辨率而需要較寬的狹縫寬度。當樣品的吸光度很高但CD信號很弱時,一方面要盡量測定CD峰所需要的足夠濃度,另一方面要設置較寬的狹縫。不過此時要特別小心,因為樣品在吸光度過高(A>2)的情況下可能存在熒光或雜散光引起的某些假象。另外,在固體CD光譜測試時也需要較大的狹縫寬度(一般要求>2nm)。
     
      (2)橢圓率和摩爾橢圓率都依賴于測量條件。因此,溫度、波長和樣品濃度總是應該特別注明的。
     
      (3)當用壓片法或石蠟油研磨法進行固體粉末樣品測試時,要盡可能地研磨獲得細小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時,必須注意某些憎水有機化合物可能溶于石蠟油中,這時所得CD光譜在某種意義上應視為溶液CD光譜。采用壓片法測試固體CD時,在手性樣品的定性濃度達到CD光譜儀檢測要求的同時,片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下,壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導CD光譜的測定。

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